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转录调控是植物生长发育、逆境反应、信号转导、抗病性等一系列基因表达的最主要调控形式,转录因子是参与基因转录水平调控过程的重要因子。MYB转录因子是植物转录因子中最大的家族之一,可以特异的识别结合基因启动子中的MYB顺式作用元件,调控与生物或非生物逆境相关的一系列基因表达。本研究对水稻转录因子OSMYB2进行研究,对OSMYB2CDNA的氨基酸序列与其他植物中已知的MYB家族的蛋白进行对比,结果表明该转录因子具有一个非常保守的R2R3MYB结构域。序列分析显示OSMYB2在N端保守域包含两个不完全的色氨酸重复,色氨酸重复区域形成螺旋一转角一螺旋的DNA结合域,还含有一个潜在的ATPGTP结合位点,一个对氧化还原反应敏感的半胱氨酸,和一个核定位序列。对水稻进行各种逆境处理和提取不同组织的RNA,将其反转录为CDNA进行RTPCR分析。结果是OSMYB2受干旱PEG、盐200MMNACL和ABA200ΜM处理诱导,但不受低温诱导。组织表达特异性检测表明,OSMYB2在根、茎、叶、开花期穗、灌浆期穗均有表达,但是在根中的转录水平最高。为了深入了解所克隆的水稻OSMYB2基因的生理功能及与非生物逆境应答的关系,构建了OSMYB2基因的植物表达载体,通过农杆菌蘸花法转化拟南芥,经潮霉素筛选、GUS活性检测和PCR检测验证筛选到转基因阳性植株。生理功能分析表明,与野生型相比,转基因株系对ABA表现出超敏,对逆境的反应表现更弱,但是对糖的反应表现更强。同时,对OSMYB2可能调控的下游基因进行了表达谱分析,结果是RD22和RD29A的表达被下调,而ADH的表达被上调。MYB转录因子能特异的与MYB顺式元件相结合。本文选择SV40的增强子中的一段MYB顺式元件TAACTG来构建酵母鱼饵质粒,利用酵母单杂交方法,对OSMYB2识别结合MYB元件的特异性进行了研究。结果表明,OSMYB2与MYB元件能特异结合,且结合后导致下游报告基因表达量减少,推测此基因为转录抑制子,在基因表达中起负调控的作用。
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